Вы здесь

Роль ендотеліну-1 і фібронектину в прогресуванні хронічного гломерулонефриту.

Автор: 
Авдєєва Олена Вікторівна
Тип работы: 
Дис. канд. наук
Год: 
2003
Артикул:
0403U002735
99 грн
(320 руб)
Добавить в корзину

Содержимое

РАЗДЕЛ 2
МЕТОДЫ ОБСЛЕДОВАНИЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БОЛЬНЫХ
2.1. Методы обследования
Под нашим наблюдением находились и подвергались специальному исследованию 113
больных хроническим гломерулонефритом с различным функциональным состоянием
почек. Обследование проводилось в условиях нефрологического отделения
Харьковской областной клинической больницы и областного нефроурологического
центра за период с 1999 по 2001 годы. Радиоиммунологические исследования
проводились на базе центральной научно-исследовательской лаборатории
Харьковского государственного медицинского университета.
Клинический диагноз заболевания и степени хронической почечной недостаточности
устанавливался на основании тщательного клинического обследования больных:
изучали анамнестические данные, данные объективного исследования, лабораторных
исследований (клинический анализ крови и мочи, анализов мочи по Зимницкому и
Нечипоренко, исследование водно-электролитного баланса, определение уровня
креатинина и мочевины в крови и моче, клубочковой фильтрации, общего белка и
белковых фракций, показателей липидного обмена, электролитов Na+, K+, Ca++, P-,
Mg++, Cl- в крови и моче). Проводилось ультразвуковое исследование почек,
внутривенная экскреторная урография. Помимо общепринятых исследований
проводилось определение уровня эндотелина-1 в крови и фибронектина в крови и
моче у исследуемых больных.
Определение уровня эндотелина-1 в крови производилось при помощи реактивов
Biotrak ™ от Amersham Pharmacia Biotеch, представляющей собой
высокочувствительную тест-систему для количественного определения ЭТ-1, Эт-2,
Big-ЭТ. Система использует высокоспецифичный [125I] ЭТ-1 радиоактивный
индикатор в сочетании с высокоспецифичной и чувствительной антисывороткой.
Разделение антител на свободные фракции производится при помощи Amеrlex ™ -М
вторых антител путем магнитного разделения или центрифугирования.
Диапазон определения ЭТ-1 в сыворотке крови составляет 0,623-79,74 пг/мл.
Чувствительность, определяемая ответом при смещении 50% радиоактивного
индикатора, составляет 11,3 пг/мл.
Исследование основано на конкуренции между немаркированным ЭТ-1 и фиксированным
количеством 125I-меченного ЭТ-1 за ограниченное количество связующих мест к
ЭТ-1 специфичным антителам.
Количество радиоактивного лиганда, связанного с антителами, будет обратно
пропорционально концентрации добавленного нерадиоактивного лиганда. Антитела,
связанные с ЭТ-1 взаимодействуют с реактивом Amеrlex ™ -М вторыми антителами
при условии связывания их с намагниченными полимерными частицами. Разделение
антител на фракции производится или магнитным разделением или
центрифугированием Amеrlex™ -М суспензии и переливанием супернатанта.
Измерение радиоактивности дает возможность посчитать количество маркированного
ЭТ-1 в связанной фракции. Концентрация немаркированного ЭТ-1 в образце
определяется по стандартной кривой.
Определение фибронектина проводилось набором ИФА-ФН, предназначенным для
количественного определения фибронектина в плазме крови человека методом
иммуноферментного анализа. Для определения фибронектина используют плазму
крови, которую получают с использованием цитрата. До проведения анализа
возможно хранение образцов плазмы при температуре –20єС не более 20 суток.
Перед проведением анализа исследуемые образцы плазмы разводят в 1000 раз: к
0,01мл исследуемой плазмы добавляют 0,99 мл 0,9% раствора хлористого натрия,
тщательно перемешивают. Затем к 0,1мл разведенной плазмы добавляют 0,9мл
фосфатно-солевого буферного раствора.
В основе анализа лежит высокоактивное связывание антител к ФН с полистиролом, в
результате чего внутренняя поверхность лунок планшета приобретает свойства
антительного сорбента, способного извлекать фибронектин из плазмы крови.
Образовавшийся комплекс выявляется с помощью тех же по специфичности антител к
ФН, конъюгированных с ферментом – пероксидазой из корня хрена. Далее
ферментативная реакция регистрируется по изменению окраски
субстратно-хромогенной смеси. Интенсивность окраски хромогена прямо
пропорциональна концентрации ФН в исследуемом образце. Использование
высокоочищенного препарата ФН обеспечивает высокую специфичность анализа.
Минимальная концентрация ФН, определяемая с помощью набора, составляет не более
20,0 нг/мл. коэффициент вариации результатов определений концентраций ФН в
образцах плазмы крови не превышает 8%. Диапазон определяемых концентраций ФН
составляет 25,0-800,0 нг/мл. Концентрация ФН, определенная с помощью набора
ИФА-ФН, в плазме крови у 100 здоровых лиц в возрасте от 20 до 50 лет находится
в пределах 323±76 мкг/мл.
2.2. Клиническая характеристика обследованных больных
В группу обследованных больных вошли 113 человек, страдающих хроническим
гломерулонефритом с различным функциональным состоянием почек. Контрольную
группу составили 27 здоровых лиц в возрасте от 18 до 45 лет.
Как видно из таблицы 2.1, среди обследуемых лиц преобладали мужчины (60,2%).
Таблица 2.1
Распределение больных по полу и возрасту
Всего
(чел.)
Пол
Возраст
Мужч.
Женщ.
До 20
21-30
31-40
41-50
51-60
Ст. 61
Абс. кол-во
113
68
45
22
24
33
19
Отн. кол-во%
100
60,2
39,8
7.1
19.5
21.2
29.2
16.8
6.2
Распределение обследуемых больных по возрастным группам выглядит таким образом,
что большинство лиц, страдающих хроническим гломерулонефритом, находятся в
возрастных группах от 20 и до 50 лет (69,9%) и только 7,1% больных были в
возрасте до 20 лет и 23% - старше 51 года.
При определени