Вы здесь

Особливості росту, будови та формоутворення кісток скелета при інтоксикації організму солями свинцю

Автор: 
Білоцерковський Віктор Павлович
Тип работы: 
Дис. канд. наук
Год: 
2005
Артикул:
0405U000970
99 грн
(320 руб)
Добавить в корзину

Содержимое

РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Исследование проведено на 122 белых лабораторных крысах-самцах, возрастом 6
месяцев, исходной массой 280-300 г и 28 новорожденных крысятах, полученных от
18 крыс-самок. Эти животные удобны для изучения остеогенеза наличием
характерных однотипных реакций на влияние разнообразных факторов и имеют
сравнительно непродолжительный цикл жизни при непрерывном ростовом процессе.
Это позволяет в течение короткого промежутка времени проследить возрастные
закономерности перестроечных процессов в костной системе, особенности ее роста,
строения и формообразования под влиянием интересующих нас химических
внешнесредовых факторов [196, 197].
В ходе эксперимента было выделено 5 основных групп для решения целевых
экспериментальных задач. Каждая из первых трех групп была распределена на три
серии (таб. 2.1). В серию 1 (контрольную) вошли животные, получавшие в течение
всего экспериментального периода дистиллированную воду. В серию 2 мы включили
животных, которые перорально получали 5 % раствор ацетата свинца из расчета 10
мг/кг массы тела в сутки, так как это примерная концентрация свинца,
находящегося во внешней среде. Серию 3 составили животные, получавшие 5 %
раствор ацетата свинца в такой же дозировке и питьевой раствор препарата
«Магне-В6», выпускаемого фармацевтической компанией «Sanofi». В состав каждой
ампулы (10 мл) входят: лактат дегидратированного магния — 186 мг, пидолат
магния — 939 мг, хлоргидрат пиридоксина — 10 мг, дисульфит натрия и натриевая
сахароза - по 15 мг. Подбор дозы препарата осуществляли исходя из средней
терапевтической дозы для взрослых, что составляет 0,3 мл/кг массы тела в сутки.
Забор материала осуществляли по истечении 30, 90, 180 суток опыта.
Таблица 2.1. Схема эксперимента.
Группа
Серия
Длительность эксперимента,
дней
Количество
животных
Возраст животных,
мес.
Масса животных,
г.
Пол
Вводи-мое вещество мг/кг (мл/кг)
массы тела в сутки
30
280-300
>
Контроль
30
280-300
>
Ацетат свинца,
10 мг/кг
30
280-300
>
Ацетат свинца,
10 мг/кг +Магне-В6
0,3мл/кг
90
280-300
>
Контроль
90
280-300
>
Ацетат свинца,
10 мг\кг
90
280-300
>
Ацетат свинца,
10 мг/кг +Магне-В6
0,3мл/кг
180
280-300
>
Контроль
180
280-300
>
Ацетат свинца,
10 мг\кг
Продолжение табл. 2.1
180
280-300
>
Ацетат свинца,
10 мг/кг +Магне-В6
0,3мл/кг
30
>
Контроль
30
>
Ацетат свинца,
10 мг\кг
30
10
>
Ацетат свинца,
10 мг/кг +Магне-В6
0,3мл/кг
105
18
280-300
>
Контроль
105
18
280-300
>
Ацетат свинца,
10 мг\кг
105
16
280-300
>
Контроль
105
16
280-300
>
Ацетат свинца,
10 мг\кг
Итого
150
Для изучения влияния интоксикации солями свинца на внутриутробный остеогенез и
коррекции его препаратом «Магне-В6» была сформирована 4 группа
экспериментальных животных, состоящая из 3 серий. Материнские особи будущего
потомства весь период беременности получали только ацетат свинца, либо ацетат
свинца в комбинации с препаратом «Магне-В6». В опыт брали половозрелых
крыс-самок в репродуктивном периоде массой 220-240 г. Чтобы вероятность
наступления беременности была максимальной, спаривание проводили при наличии у
самок эструса, для чего предварительно исследовали эстральный цикл с помощью
вагинальных мазков (рис. 2.1 – 2.3). Спаривали 2 самок и 1 самца путем
отсаживания их в отдельную клетку на 24 часа. Первым днем беременности считали
утро того дня, когда во влагалищном мазке обнаруживали сперматозоиды. Забор
материала осуществляли сразу же после рождения. Всего морфометрически
исследовали скелет 28 новорожденных крысят. В работе использовали классический
метод окраски скелета ализариновым красным [198] (рис. 2.4). Скелет изучали под
микроскопом МБС - 1 при 16 – кратном увеличении. Регистрировали размеры
первичных точек окостенения [199]. Конечности отделяли от туловища, очищали от
мягких тканей и ориентировали под стереомикроскопом так, чтобы закладки костей
располагались в одной плоскости. Измеряли длину участков окостенения и их
наибольшую ширину. Измерение обызвествленного участка в лопатке проводили
трансверсально, то есть медиолатерально вдоль лопаточного гребня.
Рис. 2.4. Новорожденные крысята, окрашенные по методу Даусона (1926)
ализариновым красным.
Рис. 2.1. Вагинальный мазок. Стадия эструса.
Рис. 2.2. Вагинальный мазок. Стадия диэструса.
Рис. 2.3. Вагинальный мазок. Стадия метаэструса.
В ходе эксперимента наблюдали за общим состоянием и поведением животных, вели
контроль массы тела с интервалом в 10 дней. Статистически достоверных различий
в динамике массы тела между опытными и контрольными животными не выявлено.
Подопытные животные имели опрятный вид, охотно поедали корм, были активны. По
завершении эксперимента животных умерщвляли декапитацией под эфирным наркозом и
проводили их скелетирование (сроки наблюдения составили 30, 90 и 180 суток).
Выделяли длинные трубчатые кости передних и задних конечностей, поясничные
позвонки, после чего эти кости промывали дистиллированной водой, просушивали
между листками фильтровальной бумаги, взвешивали на аналитических весах ВЛА -
200 с точностью до 0,1 мг. Остеометрию проводили штангенциркулем по методу
U.Duerst (1926) [201] с точностью до 0,1 мм. Программа остеометрии для
большеберцовых костей включала следующие показатели: 1) наибольшая ширина
проксимального эпифиза; 2) наибольшая ширина дистального эпифиза; 3) наибольшая
ширина середины диафиза; 4) передне-задний диаметр середины диа