Вы здесь

Вікові особливості росту, будови та формоутворення довгих кісток скелету під впливом гравітаційного перевантаження та в умовах захисту від нього (анатомо-експериментальне дослідження)

Автор: 
Чернов Антон Тимофійович
Тип работы: 
Дис. канд. наук
Год: 
2006
Артикул:
3406U001794
99 грн
(320 руб)
Добавить в корзину

Содержимое

РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Исследование проведено на 108 белых крысах линии Вистар, отличающихся от
беспородных однотипными реакциями на внешнесредовые воздействия и имеющих
сравнительно непродолжительный цикл жизни при непрерывном ростовом процессе.
Это позволяет в течение короткого промежутка времени проследить возрастные
закономерности репаративных процессов в костной системе, особенности её роста,
строения, формообразования [234].
Комиссией по биоэтике Крымского государственного медицинского университета
(протокол №5 от 25.10.2005) установлено, что проведенное научное исследование
отвечает этическим требованиям в соответствии с приказом МОЗ Украины от
01.11.2000.
Согласно схеме нашего опыта, представленной в таблице 1, все животные были
распределены на 3 возрастные группы для решения определенных экспериментальных
задач, соответственно:
- I группа неполовозрелых крыс - с исходной массой 110-120 г.;
- II группа крыс репродуктивного возраста - с исходной массой 220-240 г.;
- III группа крыс старческого возраста - с исходной массой 260 –330 г.
Все возрастные группы состояли из 3 серий, по 12 животных в каждой. В первую
серию (контрольную) вошли животные, не подвергающиеся в течение всего
экспериментального периода гравитационным перегрузкам и находящиеся в
стандартных условиях вивария. В связи с тем, что условия эксперимента
предусматривали наличие таких побочных факторов как шум, вибрация и отсутствие
освещения внутри центрифуги, для обеспечения исследования непосредственного
влияния именно гипергравитации, животные контрольных серий находились в момент
эксперимента в однотипных, светонепроницаемых, пластиковых контейнерах, на
верхней плоскости центрифуги. Во вторую серию мы включили животных, которые
подвергались воздействию гравитационных перегрузок. Перегрузки создавались при
помощи экспериментальной центрифуги ЦЭ-2/500 с радиусом 0,5 м и рабочим
диапазоном от 1 до 50 g.
Таблица 1
Схема эксперимента
Группа
Серия
Длительность
эксперимента
Масса
Количество животных
I группа
неполово-зрелые
Серия 1
контроль
10 дней
30 дней
100-110 гр
12 шт.
Серия 2
нагрузка
10 дней
30 дней
----//----
12шт
Серия 3
нагрузка + защита
10 дней
30 дней
----//----
12шт
II группа
полово-зрелые
Серия 1
Контроль
10 дней
30 дней
200-220 гр
12 шт
Серия 2
нагрузки
10 дней
30 дней
----//----
12 шт
Серия 3
нагрузки + защита
10 дней
30 дней
----//----
12 шт
III группа
старческие
Серия 1
Контроль
10 дней
30 дней
270-330 гр
12 шт
Серия 2
нагрузка
10 дней
30 дней
----//----
12 шт
Серия 3
нагрузка + защита
10 дней
30 дней
----//----
12 шт
Направление действия гипергравитации – поперечное (бок в бок). Величина
перегрузки составляла 9g, градиент нарастания - 1,4-1,6 g/с, спада - 0,6-0,8
g/с. Время экспозиции составляло 10 минут, что соответствует средней
длительности пилотажного комплекса, выполняемого современным высокоманевренным
самолетом [173]. Перегрузки моделировали в виде трёх временных промежутков,
длительностью по 3 минуты каждый с интервалом между ними в 30 сек. Эксперимент
проводился ежедневно в одно и то же время. Для обеспечения стандартных условий
животные второй серии помещались в специальные пластиковые контейнеры, что
давало возможность фиксировать всех крыс в одинаковой позиции – головой по ходу
движения. В третью серию вошли животные, подвергавшиеся воздействию идентичных
перегрузок, но находившиеся в условиях предлагаемой нами физической защиты. За
прототип физической защиты взят, так называемый, иммерсионный способ физической
защиты биологических объектов при воздействии гравитационных перегрузок,
который заключается в погружении животного в жидкую среду [235, 236].
Крыс помещали в герметичный пластиковый контейнер, обеспеченный системой
вентиляции, который, в свою очередь, помещался в металлический цилиндр,
заполненный водой. В зависимости от срока эксперимента животные каждой серии
были распределены на две подгруппы. В первую вошли крысы, подвергавшиеся
воздействию гравитационных перегрузок в течение 10 дней. Вторую составили
животные, находящиеся в эксперименте 30 дней.
В ходе эксперимента животных содержали в стандартных условиях вивария.
Наблюдали за общим состоянием и поведением животных, массу тела контролировали
с интервалом в 3 дня. Во всех возрастных группах особых различий в динамике
прироста массы выявлено не было.
Эксперимент на животных выполняли в соответствии с правилами Европейской
конвенции защиты позвоночных животных, использующихся в экспериментальных и
других научных целях [237].
Содержание и кормление животных осуществлялось в соответствии с
научно-практическими рекомендациями по содержанию лабораторных животных [238].
По завершении сроков эксперимента (10 и 30 дней) животных умерщвляли методом
декапитации под эфирным наркозом и проводили их скелетирование. Освобождали от
мягких тканей плечевые и большеберцовые кости, после чего промывали их
дистиллированной водой, просушивали между листками фильтровальной бумаги,
взвешивали на торсионных весах ВТ –500 с точностью до 1 мг. Остеометрию
проводили штангенциркулем по методу W.Duerst (1926) с точностью до 0,1 мм
[239]. Программа остеометрии включала показатели наибольшей ширины
проксимального эпифиза, наибольшей ширины дистального эпифиза, наибольшей
ширины середины диафиза, переднезаднего диаметра середины диафиза, наибольшей
длины кости.
Проведенное гистологическое исследование скелета с последующей морфометрией
позволило провести параллели между макро-, микро- и