Вы здесь

Поліморфізм фрагментів ДНК та особливості геномної організації деяких ссавців і дводольних рослин

Автор: 
Тряпіцина Наталія Василівна
Тип работы: 
Дис. канд. наук
Год: 
2006
Артикул:
0406U001990
99 грн
(320 руб)
Добавить в корзину

Содержимое

<p>Раздел 2<br />ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ<br />2.1.Характеристика объектов исследования<br />Экспериментальные исследования выполнялись на четырех видах животных<br />подсемейства Bovinae, воспроизводящихся в условиях биосферного заповедника<br />Аскания-Нова (таблица 2.1.). <br />Табл.2.1<br />Протестированные виды животных и растений<br />Протестированные виды животных и растений<br />Количество <br />Исходный материал <br />Bos Taurus (крупный рогатый скот)<br />32<br />Венозная кровь<br />Bison bonasus (зубр)<br />«-«<br />Bison bison (бизон)<br />«-«<br />Bos frontalis <br />(Bibos gauros frontalis) (гаял)<br />«-«<br />Bos taurus macrocerus (анколе-ватусси)<br />«-«<br />Glycynia Max. <br />Cортa: Харьковская, Новосибирская, Киро-воградская, Коллективная, Белоснежка,<br />Искра, Юго-западная, Скороспелка, Барвистая, Чаривниця степу, Крепыш, Успех,<br />S0412, Барвистая, Кристалл <br />13 сортов<br />Семена<br />Glycynia soya<br />19.95, 6/95, 83/95,166/98, 1050/11<br />5 популяций<br />«-«<br />Glycynia.tomentella, <br />«-«<br />Glycynia clandestine<br />«-«<br />В группу рассматриваемых видов вошли 2 вида рода Bison: зубр (Bison bonasus) и<br />бизон (Bison bison). Оба эти вида не являются объектами систематической<br />доместикации. <br />Остальные 2 вида относятся к роду Bos.Гаялы (Bibos gauros frontalis) являются<br />одомашненной формой дикого быка гаура (Bibos gaurus), ареалом обитания которого<br />является Юго-Восточная Азия. Для разделения диких и одомашненных представителей<br />гауров, гаяла иногда называют Bos gaurus frontalis, поскольку предполагается,<br />что он является результатом скрещивания между гауром (Bibos gaurus) и домашней<br />коровой Бантенги. <br />Ватусси или анколе также относят к крупному рогатому скоту (род Bos). Это<br />животное известно более 6 тысяч лет, местом ее происхождения считается Северная<br />Африка. Является потомком египетских длиннорогих коров и длиннорогих<br />пакистанских зебу. На протяжении 19-го века известно в основном как зоопарковое<br />животное. В заповеднике Аскания-Нова группа анколе-ватусси воспроизводится на<br />протяжении нескольких поколений в условиях свободного содержания. Интерес к<br />ватусси последнее время усилился благодаря низкому содержанию холестерола в его<br />мясе по сравнению с мясом других представителей крупного рогатого скота. <br />Животные были также представлены инбредной группой черно-пестрого<br />голштинизированного скота, воспроизводящегося в хозяйстве Новошепеличи, в 10-км<br />зоне отчуждения (200ки/км2) Чернобыльской атомной станции, представленной<br />восемью семьями, три из которых берут начало от животных, переживших катастрофу<br />в этой же местности: коров Альфы, Беты и Гаммы, остальные пять - от<br />черно-пестрого голштинизированного скота, завезенного в хозяйство Ново-Шепеличи<br />в 1990-1992гг из относительно чистых полесских районов Украины (коровы с<br />идентификационными номерами 6803, 6824, 6827, 6843 и 4789)(таблица 2.2). <br />Табл.2.2 <br />Клички и идентификационные номера животных<br />Поко<br />ление<br />семья<br />2 семья<br />3 семья<br />4 семья<br />5 семья<br />6 семья<br />7 семья<br />8 семья<br />F0<br />Альфа<br />Бета<br />Гамма<br />6824<br />6843<br />6827<br />4789<br />6803<br />8+<br />Уран<br />F1<br />Роза<br />49<br />15<br />160<br />166<br />4777<br />42<br />169<br />170<br />118<br />12<br />F2<br />41<br />11<br />113<br />137<br />172<br />178<br />99<br />100<br />81<br />161<br />179<br />174<br />12<br />F3<br />175<br /><br />Всего было обследовано 32 животных, представляющих 4 поколения,<br />воспроизводящиеся в условиях действия низкодозового хронического излучения. Все<br />животные, за исключением Альфы, Беты, Гаммы и завезенных в 1990-92гг пяти<br />полесских коров с идентификационными номерами 6803, 6824, 6827, 6843 и 4789,<br />происходят от одного производителя - быка Урана, также пережившего катастрофу в<br />этой же местности. <br />В работе были также протестированы растения 4-х видов подсемейства Phaseoleae,<br />класса Dycotyledonae. Образцы 13-ти сортов культурной сои Glycynia Max., а<br />также 2-х видов дикой сои Glycynia.tomentella и Glycynia clandestine были<br />любезно предоставлены для исследований директором Всероссийского института<br />растениеводства им. Н.И.Вавилова, академиком В.И.Драганцевым. Образцы 5-ти<br />диких уссурийских популяций сои Glycynia soya любезно предоставлены научным<br />сотрудником ВНИИ сои г.Благовещенск, Россия Сеферовой И.В. <br />Работа проводилась в отделе молекулярно-генетических исследований Института<br />агроэкологии УААН. <br />2.2. Методы исследования<br />2.2.1. Полимеразная цепная реакция с микросателлитными праймерами (ISSR PCR). В<br />работе были использованы микросателлитные праймеры с ди- и тринуклеотидными<br />коровыми мотивами и различными якорными нуклеотидами (таблица 2.3.): <br />Табл.2.3<br />Использованные в работе микросателлитные праймеры<br />праймер<br />5'<br />фланк<br />%GC<br />3’<br />фланк<br />(AC)9G<br />5'-ACA CAC<br />52%<br />CAC ACG-3'<br />(GA)9C<br />5'-GAG AGA<br />52%<br />AGA GAC-3’<br />(GT)10C<br />5’-GTG TGT<br />52%<br />TGT GTC-3’<br />(CT)9G<br />5'-CTC TCT<br />52%<br />TCT CTG-3’<br />(АСС)6 G<br />5'-АСС ACC<br />68%<br />CCA ССG-3'<br />(AGC)6G<br />5'-AGC AGC<br />68%<br />GCA GCG-3'<br />(AGC)6C<br />5'-AGC AGC<br />68% <br />GCA GCC-3’<br />(AGC)6Т<br />5'-AGC AGC<br />63%<br />GCA GCТ-3’<br />(TCG)6G<br />5'-TCG-TCG<br />68%<br />CGT CGG-3’<br />10<br />(CAC)7А<br />5'- CAC CAC<br />63%<br />ACC АСА-3’<br />11<br />(CAC)7Т<br />5'- CAC CAC<br />63%<br />ACC АСТ-3’<br />12<br />GT(CAC)7<br />5’-GTC ACC<br />65%<br />ACC CAC-3'<br />13<br />(СТС)6А<br />5’-СТС CTC<br />63%<br />TCC ТСА-3'<br />14<br />(СТС)6С<br />5’-СТС CTC<br />63%<br />TCC ТСС-3'<br />Получение мультилокусных амплификационных спектров основывалось на<br />использовании классической методики [170]. Исходным материалом для исследований<br />у животных являлись образцы крови (лейкоциты). Кровь для исследования брали из<br />яремной вены животных в пробирки с гепарином (гепарин из расчета 25 МЕ на 1 мл<br />крови). Ядерную ДНК из крови выделяли по следующей методике: к 200 мкл<br />гепаринизированной цельной крови добавляли 1 мл деионизированной воды и<br />подвергали образец замораживанию-оттаиванию. Затем проводили центрифугирование<br />при 7 тыс.об/мин. 5 мин в центрифуге Eppendorf. Супернатант сливали. Повторяли<br />процедуру д</p>