Вы здесь

Пошук засобів профілактики ішемії головного мозку серед антиоксидантів в ряду похідних тіазолідину

Автор: 
Оглобліна Мирослава Володимирівна
Тип работы: 
Дис. канд. наук
Год: 
2006
Артикул:
3406U003577
99 грн
(320 руб)
Добавить в корзину

Содержимое

ГЛАВА 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Исследования выполнены на 920 беспородных половозрелых крысах обоего пола
массой 160-220 г. В эксперименте использовались животные после прохождения
карантина в условиях вивария ЛугГМУ в течение 14 дней.
Опыты проводились в лаборатории кафедры фармакологии ЛугГМУ, сертифицированной
ГФЦ МЗ Украины (удостоверение № 41 от 30.05.2002г. и № 07 от 29.09.2005г.)
согласно требований комитета по биоэтике ЛугГМУ (приказ ректора № 3 от
10.11.2005г.) в соответствии с методическими рекомендациями [81]. Животные
получали стандартную диету в виде гранулированного корма по установленным
нормам. Доступ крыс к воде был свободным.
Экспериментальной моделью острой ишемии головного мозга служил патологический
процесс, развивающийся у подопытных животных, подвергшихся необратимой
одномоментной двусторонней окклюзии общих сонных артерий до места её бифуркации
на наружную и внутреннюю ветви [177]. Оперативное вмешательство проводили под
натрий-тиопенталовым (70 мг/кг) наркозом путем рассечения на шее вдоль трахеи
кожи, тупого расслоения подкожно-жировой клетчатки и мышц с последующим
отпрепарированием правой и левой общих сонных артерий и перевязкой их шелковой
лигатурой. Ушивание операционного доступа осуществлялось послойно с обработкой
кожи 2% раствором бриллиантового зеленого.
Доклиническое изучение специфической активности фармакологических средств,
предназначенных для лечения нарушений мозгового кровообращения, осуществляли в
соответствии с методическими рекомендациями ГФЦ МЗ Украины [82].
В скрининговой серии исследований использовались 16 оригинальных соединений
производных тиазолидина. Субституенты (Les-1 - Les-16) синтезированы в
лаборатории кафедры фармацевтической, органической и биоорганической химии
Львовского национального медицинского университета им. Даниила Галицкого,
профессором Р.Б. Лесыком. Виртуальный скрининг проведен в рамках
прогнозирования возможных фармакологических эффектов и детализации дальнейших
исследований с использованием пакета аналитических программ PASS C&T
(Prediction of Activity Spectra for Substances: Complex & Training), включающих
выборку, которая содержит более 30000 биологически активных соединений и более
400 фармакологических эффектов, механизмов действия, а также сведения о
мутагенности, канцерогенности, тератогенности и эмбриотоксичности, которые
весьма важны на этапе внедрения потенциальных лекарств в практику [85,175].
Биологическая активность в программе описывается качественным образом. В
результате прогноза, кроме названий активности, приводится вероятность
присутствия (Ра) и отсутсвия (Pi) каждого действия (размерность от 0 до 1).
Антиоксидантную активность (АОА) потенциальных церебропротекторов в опытах in
vitro определяли согласно методических рекомендаций ГФЦ МЗ Украины с помощью
метода неферментативного инициирования ПОЛ, а также по степени инактивации
супероксидрадикала, что в значительной мере повышает информативность полученных
результатов и расширяет рамки их биологического толкования [146]. В качестве
препаратов сравнения использовали классические антиоксиданты, а именно: для
водорастворимых соединений - кислоту аскорбиновую, а жирорастворимых –
б-токоферола ацетат [17]
При оценке антиоксидантной активности исследуемых тиазолидинов с помощью метода
неферментативного инициирования ПОЛ в качестве субстрата использовали суспензию
яичных липопротеидов. Испытуемые вещества добавляли к суспензии в концентрации
10-3 моль/л. Свободнорадикальную реакцию индуцировали 0,7% раствором
FeSO4•7H2O. Инкубационную смесь помещали в термостат при температуре 37оС.
Исследования проводили в динамике через 15, 30, и 60 минут с момента начала
индукции свободно-радикального окисления. При этом цепную реакцию останавливали
внесением в модельную систему 25% раствора трихлоруксусной кислоты, содержащей
2,5 мг/100 мл трилона Б, необходимого для связывания Fe2+ [146].
Интенсивность протекания процессов ПОЛ в модельной системе оценивали по
концентрации ТБК-реактантов с учетом коэффициента молярной экстинции, а АОА (%)
определяли по формуле [107,146]:
АОА= (Д к - Д о) / Д к · 100% , где
Д к- содержание ТБК- реактантов в контрольной пробе, нмоль/л;
Д о- содержание ТБК- реактантов в опытной пробе, нмоль/л.
Индукцию супероксидрадикала при исследовании АОА изучаемых тиазолидинов
проводили путём аутоокислении адреналина в адренохром в щелочной среде.
Исследуемые вещества использовали в концентрации 10-3 моль/л. Реакцию запускали
внесением в систему 0,4 мл водного раствора адреналина (2,25*10-3М) с
экспозицией 3 минуты. АОА исследуемых соединений определяли
спектрофотометрически по степени торможения аутоокисления адреналина в
окрашенный продукт – адренохром при длине волны 480 нм и выражали в % по
формуле [146,293]:
АОА= (Д х - Д о) / Д х · 100% , где
Д х – оптическая плотность, отображающая скорость неингибированного
аутоокисления адреналина, отн.ед;
Д о - оптическая плотность, отображающая скорость аутоокисления адреналина в
присутствии исследуемых соединений отн.ед.
В серии фармакологического скрининга потенциальных церебропротекторов,
испытуемые соединения вводили внутрибрюшинно однократно за 30 минут до
лигирования общих сонных артерий в дозе 100 мг/кг. При выборе доз оригинальных
химических соединений исходили из данных литературы и многолетнего опыта работы
сотрудников кафедры фармакологии ЛугГМУ в области фармакологической коррекции
экстремальных кислороддефицитных состояний [29,33,78,133,134,153]. В качестве
препаратов сравнения использовали кавинтон (0,5% раствор в ампулах по