Вы здесь

Хірургічне лікування гострого деструктивного панкреатиту із застосуванням імунотропних препаратів

Автор: 
Доценко Дмитро Григорович
Тип работы: 
Дис. канд. наук
Год: 
2007
Артикул:
0407U000227
99 грн
(320 руб)
Добавить в корзину

Содержимое

РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Методика эксперимента по исследованию осмотической и противомикробной активности антисептиков
С целью сравнить противомикробную активность фотохимически активированных и неактивированных 40% раствора мази "Левомеколь", 0,02 % раствор хлоргексидина биглюконата, изотонического раствора натрия хлорида проведено исследование чувствительности микрофлоры к исследуемым лекарственным препаратам методом диффузии препарата в агар (метод "колодцев") [202]. Для того чтобы выяснить, как влияет фотохимическая активация на осмотическую активность 40% раствора мази "Левомеколь", определяли кинетику абсорбции воды фотохимически активированным и неактивированным 40% раствором мази "Левомеколь" через полупроницаемую мембрану [202].
Метод диффузии препарата в агар заключается в том, что в чашку Петри с 1,5% мясо-пептонным агаром, разлитым тонким слоем в качестве "подстилки", помещали стерильные металлические цилиндры диаметром 8 мм [202].
Изготовляли стандарт взвеси суточной культуры Esherichia coli ATCC 25922 в изотоническом растворе натрия хлорида (2 млрд. микробных тел в 1 мл) [202]. 1мл изготовленной стандартной взвеси добавляли к 13 мл 1,5% предварительно расплавленного и затем охлажденного до 45°С мясо-пептонного агара. Смесь тщательно перемешанной взвеси и агара вылили вторым слоем на чашку Петри с агаром и цилиндрами. То же самое выполнили со второй чашкой Петри.
После застывания второго слоя агара с культурой цилиндры извлекали, и в образовавшиеся лунки вносили исследуемые лекарственные препараты в определённой последовательности. Лунка № 1 - изотонический раствор натрия хлорида. Лунка № 2 - изотонический раствор натрия хлорида, который в течение 10 мин. в количестве 200 мл в асептических условиях подвергался фотохимической активации непосредственно перед исследованием аппаратом фотохимической активации Valkion (аппарат фотохимической активации производства компании Polyvalk AB, Гетеборг, Швеция, зарегистрированный Комитетом по новой медицинской технике МЗ Украины № 342/97). Лунка № 3 - 0,02% раствор хлоргексидина биглюконата. Лунка № 4 - 0,02% раствор хлоргексидина биглюконата, который в течение 10 мин. в количестве 200 мл в асептических условиях подвергался фотохимической активации непосредственно перед исследованием аппаратом фотохимической активации Valkion. Лунка № 5 - 40% раствор мази "Левомеколь". Лунка № 6 - 40% раствор мази "Левомеколь", который в течение 10 мин. в количестве 200 мл в асептических условиях подвергался фотохимической активации непосредственно перед исследованием аппаратом фотохимической активации Valkion.
Затем чашки Петри с исследуемыми средами помещали в термостат при температуре 37°С на 24 часа.
После извлечения из термостата определяли чувствительность культуры к изучаемому препарату по величине зоны задержки роста вокруг лунки, выраженной в миллиметрах (n=6).
Метод определения кинетики абсорбции препаратами воды заключается в том, что в эксперименте использовали специальный диализатор, где в качестве мембраны применялся целлофан толщиной 45мкм. В процессе диализа через эту мембрану происходила диффузия воды в систему с более высокой концентрацией кинетически активных единиц - молекул или ионов (лекарственных веществ) [202].
Устройство камеры для диализа представлено на рис. 2.1.
Цилиндр с образцом (40% раствор мази "Левомеколь" или фотохимически активированный 40% раствор мази "Левомеколь") и мембраной взвешивали до начала опыта, а затем через каждый час до наступления равновесия, при котором прекращается поглощение воды исследуемым образцом.

Рис. 2.1. Схема камеры для диализа:
1 - стеклянный цилиндр;
2 - стеклянный двустенный сосуд;
3 - крышка сосуда из стекла, имеющая отверстия для цилиндра и термометра;
4 - дно стеклянного цилиндра (целлофановая мембрана);
5 - термометр.

Для контроля исследовали осмотическую активность стандартного гипертонического (10%) раствора поваренной соли. Затем на основе полученных данных строили кривую, и по её изменению судили об абсорбционной активности препарата.

2.2. Характеристика обследованных животных, методика эксперимента и методы обследования
Эксперимент выполнен на 120 взрослых самцах беспородных белых крыс с массой тела 370-460 г. Животные были разбиты на четыре группы по 30 (25%) крыс в каждой.
Всем животным вызывали распространенный перитонит путем введения в брюшную полость 0,9 мл 30% каловой смеси на 100 г массы животного [196, 218].
Через 24 часа после моделирования перитонита животным выполняли лапаротомию. Крысу фиксировали в положении на спине. Под общим ингаляционным эфирным наркозом в асептических условиях производили послойное рассечение тканей передней брюшной стенки, выполняли забор крови для биохимических исследований, экссудата брюшной полости, биопсию париетальной брюшины передней брюшной стенки.
В 1-й группе крыс брюшную полость санировали фотохимически активированной мазью на полиэтиленоксидной основе (40% раствор мази "Левомеколь") в количестве от 1 до 1,5 мл, в зависимости от объема брюшной полости. Во 2-й группе крыс брюшную полость санировали 40% раствором мази "Левомеколь". Животным 3-й группы санацию производили 0,02% раствором хлоргексидина биглюконата. У крыс 4-й группы брюшную полость не санировали. Операционная рана послойно ушивалась наглухо. В работе был использован количественный критерий, называемый "трехдневный критерий летальности", который показывает число животных, проживших с острым разлитым перитонитом свыше 3 суток [202]. Эти животные в дальнейшем считались условно выжившими. Поэтому все наблюдения проходили до 3 суток от начала эксперимента. Крыс выводили из эксперимента передозировкой паров этилового эфира, с учётом требований Ванкуверской конвенции о биомедицинских экспериментах [249].
Исследование крови, экссудата и брюшины проводили перед началом лечения и на 1, 2, 3 сутки лечения. Исследование эксс