Вы здесь

Стан гіпофізарно-тиреоїдної системи і фізіологічного калоригенезу у білих щурів при гострій дії холоду.

Автор: 
Ревякіна Олена Геннадіївна
Тип работы: 
Дис. канд. наук
Год: 
2007
Артикул:
0407U003254
99 грн
(320 руб)
Добавить в корзину

Содержимое

РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Выбор объекта исследований
Эксперименты были проведены на взрослых белых крысах-самцах массой 304±3 г. Выбор белых крыс в качестве подопытных животных был обусловлен следующими обстоятельствами.
Во-первых, общие закономерности организации и функционирования гипофизарно-тиреоидной системы, системы терморегуляции и нервно-мышечной системы крысы существенно не отличаются от таковых других представителей высших млекопитающих [100, 114, 126, 128], что делает возможным интерпретацию и сопоставление полученных нами результатов эксперимента с данными специалистов, использовавших в качестве объекта исследований других млекопитающих.
Во-вторых, крысы довольно часто используются в разнообразных экспериментах по изучению физиологии терморегуляции, морфо-функционального состояния эндокринной системы, нервно-мышечного аппарата, в том числе, собственно скелетных мышц и нервно-мышечных синапсов [13, 62, 71, 77, 115 и др.], что позволяет более объективно трактовать полученные в нашей работе результаты.
В-третьих, использование в качестве подопытного животного белой крысы позволило сделать наши исследования достаточно массовыми и репрезентативными.
В эксперимент отбирали животных, у которых отсутствовали возможные внешние проявления дисфункции щитовидной железы и нервно-мышечной системы, такие как тремор тела, спонтанные движения по кругу, расстройства локомоции (в частности, раскачивание туловища при движении, попеременное подтягивание задних лап при ходьбе), отсутствие реакции на обстановку, видимая атрофия мышц туловища и конечностей, диарея, дистрофические изменения, нетипичная для здоровых пребывающих в состоянии покоя крыс ректальная температура (ниже 37?С и выше 39?С), вялость и медлительность движений или, напротив, повышенная возбудимость и агрессивность, излишняя складчатость кожи, видимые изменения шерсти (выпадение, взъерошенность) и кожных покровов (в частности, их гиперемия), экзофтальм.
Все перечисленные факторы отбора экспериментальных животных способствовали достаточно хорошей стандартизации исходных показателей и условий опытов.

2.2. Методика определения гормонов аденогипофиза и щитовидной железы

Среди многочисленных методов определения содержания гормонов гипофизарно-тиреоидной системы нами был выбран метод иммуноферментного анализа. У белых крыс в сыворотке крови определяли содержание тиреотропного гормона гипофиза (ТТГ), общего и свободного тироксина (Т4 общ. и Т4 своб.), а также общего и свободного трийодтиронина (Т3общ. и Т3 своб.). Характеристика некоторых параметров метода приведена в таблице 2.1. Отметим, что в качестве набора реагентов для определения содержания гормонов использовали наборы группы "ТироидИФА" производства (Россия) рекомендованные Комиссией по наборам реагентов для радиоиммунологического и других видов иммунохимического анализа Комитета по новой медицинской техники МЗ РФ (протокол №9 от 23 октября 2000 г). Определение гормонов проводилось с помощью метода иммуноферментного анализа с использованием системы фирмы ''ThermoLabsystems'' и стандартным набором реагентов (ТиродИФА-ТТГ-1, ТироидИФА-тироксин-01, ТироидИФА-свободный Т4 и ТироидИФА-трийодтиронин-01 и ТироидИФА-трийодтиронин свободный).
Как видно из таблицы 2.1, концентрации тиреотропного гормона гипофиза и изучаемых йодтиронинов в сыворотке крови белых крыс, определенных в наших экспериментах, находятся в рамках значений для указанных гормонов, полученных у человека.
Таблица 2.1
Сравнительная количественная характеристика содержания гормонов системы "гипофиз-щитовидная железа" у человека и белых крыс

ГормонКонцентрация* (человек)Концентрация**
(белые крысы)РеактивТТГ
(тиреотропный гормон гипофиза)
0,23-3,4
мкМЕ/мл.
0.154?0.004
мкМЕ/мл.
ТироидИФА-ТТГ-1Тироксин
общий,
Т4 общ.53-158
нмоль/л
69,4?2.98
нмоль/л
ТироидИФА-тироксин-01Тироксин свободный,
Т4 св.10,0-23,2
пмоль/л29,10?0.68
пмоль/лТироидИФА-свободный Т4Трийодтиронин
общий,
Т3 общ.1,0-2,8
нмоль/л
2,2±0,04
нмоль/л
ТироидИФА-трийодтиронина-01Трийодтиронин
свободный,
Т3 св.3,95-6,8
пмоль/л3,57±0,14
пмоль/лТироидИФА-
свободный Т3
Примечание: * - значения концентрации гормонов сыворотки крови, приведенные Комиссией по наборам реагентов для радиоиммунологического и других видов иммунохимического анализа Комитета по новой медицинской техники МЗ РФ (протокол №9 от 23 октября 2000 г);
** - значения концентрации гормонов сыворотки крови, определенные в настоящей работе.

Ход опыты с определением концентрации гормонов был следующим. После выполнения всех предусмотренных процедур и измерения изучаемых физиологических показателей животные забивались путем декапитации, после чего кровь бралась для последующего анализа.

2.3. Методика изучения общей энергетики организма и состояния интегральных показателей системы терморегуляции

Состояние общей энергетики организма наиболее надежно исследовать путем измерения скорости поглощения кислорода и выделения углекислого газа целостным организмом, либо методом прямой калориметрии []. В нашей работе использовался метод регистрации величины потребления кислорода в открытой камерной системе (Рис.2.1).

Установка включает термокамеру с животным, температура которой может быть задана на уровне до -250С, систему газового анализатора и ректальный термометр с цифровой регистрацией. В качестве газоанализатора использовался электронный газоанализатор фирмы ''Radiometer'' с полярографическим датчиком и встроенным компьютером, позволяющим проводить автоматическую калибровку и измерение концентрации кислорода в абсолютных величинах (парциальное давление, мм.рт.ст.) в анализируемой смеси. Система прокачки исследуемого воздуха и газовые часы позволяли проводить расчет скорости потребления кислорода экспериментальным животным. Величина потребления кислорода в конечном итоге переводилась в общепринятые величины