Вы здесь

Особливості росту, будови та формоу-творення хребців при дії гіпергравітації і захисті від неї

Автор: 
ВЕРЧЕНКО ІГОР АНАТОЛІЙОВИЧ
Тип работы: 
Дис. канд. наук
Год: 
2008
Артикул:
0408U001645
99 грн
(320 руб)
Добавить в корзину

Содержимое

РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Исследование проведено на 108 белых крысах линии Вистар. Эти
животные удобны для изучения остеогенеза наличием характерных
однотипных реакций на влияние разнообразных факторов и имеют
сравнительно непродолжительный цикл жизни при непрерывном ростовом процессе. Это позволяет в течение короткого промежутка времени
проследить возрастные закономерности перестроечных процессов в костной ткани, особенности роста, строения и формообразования под влиянием
интересующих нас физических факторов [ 208].
Комиссией Крымского государственного медицинского университета по биоэтике (протокол № 6 от 23.10.2007) установлено, что проведенное
научное исследование отвечает этическим требованиям в соответствии с приказом МОЗ Украины от 01.11.2000.
Согласно схеме эксперимента, представленной в таблице 1, все
животные для решения определенных экспериментальных задач были
распределены на 3 возрастные группы:
- I группа неполовозрелых животных с исходной массой 110-120 г.;
- II группа животных репродуктивного возраста с исходной массой 220-240 г.;
- III группа животных периода старческих изменений с исходной
массой 300 -330 г.
Каждая из возрастных групп состояла из 3 серий по 12 животных в
каждой. В первую серию (контрольную) вошли животные, не
подвергавшиеся гравитационным перегрузкам в течение всего
экспериментального периода и находившиеся в стандартных условиях
вивария. В связи с тем, что условия эксперимента предусматривали наличие таких побочных факторов, как шум, вибрация и отсутствие освещения
внутри центрифуги, для обеспечения исследования непосредственного влияния именно гипергравитации животные контрольных серий находились в момент эксперимента в однотипных светонепроницаемых пластиковых
контейнерах на верхней плоскости центрифуги. Во вторую серию мы
включили животных, которые подвергались воздействию гравитационных перегрузок без использования физической защиты. Перегрузки создавались при помощи экспериментальной центрифуги ЦЭ-2/500 с радиусом 0,5 м и
рабочим диапазоном от 1 до 50 g.
Таблица 1
Схема эксперимента
ГруппаСерияДлительность
экспериментаМассаКоличество животныхI группа
неполово-зрелыеСерия 1
контроль10 дней30 дней100-120 гр12Серия 2
нагрузка 10 дней30 дней----//----12Серия 3
нагрузка + защита10 дней30 дней----//----12II группа
полово-зрелыеСерия 1
Контроль10 дней30 дней220-240 гр12Серия 2
нагрузка 10 дней30 дней----//----12Серия 3
нагрузка + защита10 дней30 дней----//----12III группа
период старческих измененийСерия 1
Контроль10 дней30 дней300-330 гр12Серия 2
нагрузка10 дней30 дней----//----12Серия 3
нагрузка + защита10 дней30 дней----//----12
Животные третьей серии подвергались гравитационным перегрузкам в условиях физической защиты. В зависимости от срока эксперимента было выделено 2 подгруппы: подгруппа А подвергалась воздействию
гравитационных перегрузок в течении 10 дней; подгруппа Б подвергалась
нагрузкам в течение 30 дней.
Направление действия гипергравитации - поперечное (грудь - спина). Величина перегрузки составляла 9g, градиент нарастания - 1,4-1,6 g/с, спада - 0,6-0,8 g/с. Время экспозиции составляло 10 минут, что соответствует средней длительности пилотажного комплекса, выполняемого современным высокоманевренным самолетом [134]. Перегрузки моделировали в виде трёх временных промежутков, длительностью по 3 минуты каждый с интервалом между ними в 30 сек. Эксперимент проводился ежедневно в одно и то же время. Для обеспечения стандартных условий животные второй серии помещались в специальные пластиковые контейнеры, что давало возможность фиксировать всех крыс в одинаковой позиции - головой по ходу движения. В третью серию вошли животные, подвергавшиеся воздействию идентичных перегрузок, но находившиеся в условиях метода физической защиты. Прототипом метода физической защиты взят иммерсионный способ физической защиты биологических объектов при воздействии гравитационных перегрузок, который заключается в погружении животного в жидкую среду [209, 210].
Крыс помещали в герметичный пластиковый контейнер, обеспеченный системой вентиляции, который, в свою очередь, помещался в металлический цилиндр, заполненный водой.
В ходе эксперимента животных содержали в стандартных условиях вивария. Наблюдали за общим состоянием и поведением животных, массу тела контролировали с интервалом в 3 дня. Во всех возрастных группах достоверных различий в динамике прироста массы выявлено не было.
Эксперимент на животных выполняли в соответствии с правилами Европейской конвенции защиты позвоночных животных, использующихся в экспериментальных и других научных целях [211].
Содержание и кормление животных осуществлялось в соответствии с научно-практическими рекомендациями по содержанию лабораторных
животных [212].
Животных выводили из эксперимента по завершении сроков (10 и 30 суток) путем декапитации под эфирным наркозом с последующим
скелетированием и выделением позвоночного столба.
Вычленяли исследуемые позвонки и тщательно очищали их от мягких тканей, промывали дистиллированной водой, просушивали между листками фильтровальной бумаги, взвешивали на торсионных весах ВТ -500 с
точностью до 1 мг. Производили остеометрию VI шейного, IV и XI грудных, а также III поясничного позвонков штангенциркулем по методу U. Duerst (1926) [213] с точностью до 0,1 мм. Программа остеометрии включала
определение вентральной и дорсальной длины, поперечного и сагиттального диаметров каудальной и краниальной поверхностей тел изучаемых
позвонков.
Для гистологического исследования производили забор материла из трех отделов: шейного (С4), грудного (Th9), поясничного (L4). Позвонки
фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, декальцинировали в 5% муравьиной кислоте, обезвоживали в спиртах восходящей концентрации и заливали в парафиновые блоки. Готовили гистологические срезы толщиной