Вы здесь

Зміни показників антиоксидантної та імунної систем в спортсменів, які займаються греко-римською боротьбою, та їх корекція з допомогою антиоксидантів та ентеросорбентів

Автор: 
Ступченко Світлана Іванівна
Тип работы: 
Дис. канд. наук
Год: 
2008
Артикул:
0408U004543
99 грн
(320 руб)
Добавить в корзину

Содержимое

ГЛАВА 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объект исследования
Под наблюдением находилось 162 спортсмена, занимавшихся греко-римской борьбой,
мужского пола, в возрасте от 18 до 23 лет (средний возраст – 20,6±1,2 года).
Все спортсмены имели массовые разряды и тренировочный стаж от 3 до 7 лет.
Тренировочный макроцикл включал 3 периода: (1) подготовительный длительностью 3
месяца, с частотой тренировок 3 раза в неделю по 2 ч каждая; (2)
соревновательный длительностью 2-3 дня, с количеством спаррингов 2-6 за всё
время соревнований; (3) переходный длительностью 10 дней с облегчёнными
тренировками 2 раза в неделю. Для выработки нормативных показателей было
обследовано 46 практически здоровых нетренированных мужчин 18-23 лет. Работу
выполняли с соблюдением всех положений биоэтики (Страсбург, 1985 год).
Для достижения поставленных задач все спортсмены были разделены на группы
следующим образом. Контрольную группу, не получавшую антиоксиданты и
энтеросорбенты, составили 33 спортсмена. 1-ю опытную группу, получавшую в
течение тренировочного макроцикла антиоксидант «Селен актив», составили 32
спортсмена. 2-ю опытную группу составили 34 спортсмена, получавшие препарат
«Три-Ви-Плюс». 32 спортсмена 3-й опытной группы получали «Силлард П», а 31
спортсмен 4-й опытной группы – «Энтеросгель».
Антиоксиданты и энтеросорбенты спортсменам с первого дня подготовительного
периода тренировочного макроцикла назначали следующим образом. Препарат «Селен
актив» спортсмены принимали дважды в день внутрь в суточной дозе 50 мг селена,
50 мг аскорбиновой кислоты и 150 мг сорбита в течение всего тренировочного
макроцикла. Антиоксидантный комплекс «Три-Ви-Плюс» спортсмены принимали по 1
таблетке 3 раза в сутки внутрь в течение 15 дней. Фитосорбент «Силлард П»
спортсмены принимали по 2 г (1 столовая ложка) 3 раза в день через час после
еды в течение 7 дней. «Энтеросгель» со сладким вкусом (в виде пасты для
перорального применения) спортсмены принимали внутрь 2 раза в сутки за 2 ч до
приёма пищи, запивая достаточным количеством воды, в суточной дозе 45 г (3
столовых ложки) в течение 15 дней.
2.2. Методы исследования
Забор крови для иммунологических и биохимических исследований проводили в
начале и в конце каждого периода тренировочного макроцикла. Для выделения
лимфоцитов 15 мл крови брали из локтевой вены в пластиковые пробирки с
антикоагулянтом (раствор гепарина + раствор Версена) после 15 минут пребывания
обследуемого в состоянии покоя в положении сидя. Лимфоциты выделяли на
градиенте плотности фиколла-верографина по модифицированной методике Boyum.
Цельную кровь, разведенную в соотношении 1:1 средой 199, наслаивали на смесь
фиколла-верографина и центрифугировали 20 минут при 500 g. Снятые интерфазные
кольца мононуклеарных клеток дважды отмывали в течение 10 минут средой 199.
Затем ресуспендировали в полной питательной среде. Для подготовки суспензии
лимфоцитов в концентрации 2*(9 lg)/л проводили расчет по формуле: В =
(а/40-1)*с, где а – количество лимфоцитов в камере Горяева; с – количество
суспензии клеток, оставленных в пробирке; В – количество фосфатно-буферного
раствора, которое необходимо добавить. Использование описанного метода
позволяет выделять из крови около 90 % лимфоцитов. Суправитальное окрашивание
выделенных лимфоцитов трипановым синим свидетельствовало о жизнеспособности
98-99 % клеток.
Популяционный и субпопуляционный составы лимфоцитов (общих Т-лимфоцитов,
Т-хелперов/индукторов, Т-супрессоров/цитотоксиков, натуральных киллеров и
В-лимфоцитов) проводили методом непрямой иммунной флуоресценции с
использованием моноклональных антител, соответственно, CD3, CD4, CD8, CD16,
CD22 производства научно-производственного центра «Медбиоспектр» (Москва,
Российская Федерация). Клетками-мишенями для постановки реакции служили
лимфоциты, цитотоксическими антителами – моноклональные антитела в разведении
0,1-0,2 мкг/мл. Литической системой служила сыворотка крови кроликов,
проверенная на нетоксичность. Для тестирования использовали 96-луночные
планшеты, в лунки которых вносили по 0,025 мл моноклональных антител и
суспензии лимфоцитов в концентрации 2-4*(6 lg)/мл и инкубировали при 37 °С в
течение 30-40 минут. Потом надосадочную жидкость отбирали, в лунки добавляли по
0,05 мл свежего комплемента и инкубировали планшеты при 37 °С в течение часа.
Для остановки цитотоксической реакции планшеты помещали в холодильник на 10-15
минут, потом в лунки вносили 0,1 % раствор трипанового синего и учитывали
результаты в камере Горяева под световым микроскопом.
Популяции нейтрофилов периферической крови человека получали с помощью
центрифугирования на двойном градиенте плотности 1,093 фиколла-верографина
(Wong and Wilson, 1975).
Определение фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови проводили
чашечным методом. В стерильную пробирку, содержащую 0,6 мл заранее внесенного
раствора гепарина 1:10, вносили 10 мл крови из локтевой вены. Кров тщательно
перемешивали и центрифугировали 10 минут при 1000 оборотах в минуту. Плазму
вместе со слоем лимфоцитов осторожно отсасывали и вносили в стерильную
центрифужную пробирку, добавляя 5-6 мл среды 199. Лейкоциты отмывали
центрифугированием в течение 10 минут при 1000 оборотах в минуту. Надосадочную
жидкость удаляли, а лейкоциты, находящиеся в осадке, ресуспендировали в среде
199 дважды, каждый раз повторяя процедуру «мягкого» центрифугирования. После
последнего центрифугирования пипеткой отсасывали надосадочную жидкость и часть
клеточной суспензии, оставляя в центрифужной пробир