Вы здесь

Патогенетичні особливості розвитку імунних та метаболічних порушень у спортсменів, які займаються греко-римською боротьбою, та їх корекція антиоксидантами

Автор: 
Андреєва Вікторія Валентинівна
Тип работы: 
Дис. канд. наук
Год: 
2009
Артикул:
3409U004416
99 грн
(320 руб)
Добавить в корзину

Содержимое

ГЛАВА 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объект исследования
Под наблюдением находилось 210 спортсменов, занимавшихся греко-римской борьбой,
мужского пола, в возрасте от 18 до 22 лет (средний возраст – 20,6±1,2 года).
Все спортсмены имели массовые разряды и тренировочный стаж от 3 до 7 лет.
Тренировочный макроцикл включал 3 периода: (1) подготовительный длительностью 3
месяца, с частотой тренировок 3 раза в неделю по 2 ч каждая; (2)
соревновательный длительностью 2-3 дня, с количеством спаррингов 2-6 за всё
время соревнований; (3) переходный длительностью 10 дней с облегчёнными
тренировками 2 раза в неделю. Для выработки нормативных показателей было
обследовано 50 практически здоровых нетренированных мужчин 18-23 лет. Работу
выполняли с соблюдением всех положений биоэтики (Страсбург, 1985 год). Все
спортсмены и лица, не занимавшиеся спортом систематически, дали согласие на
обследование и участие в испытаниях, цифровые результаты которых вошли в данное
диссертационное исследование.
Для достижения поставленных задач все спортсмены были разделены на группы
следующим образом. Для изучения влияния на иммунный и метаболический статус
спортсменов физических нагрузок малой и высокой интенсивности общую популяцию
спортсменов разделили на две группы – А и В. Группу А составили 90 спортсменов
с малой интенсивностью физических нагрузок в процессе тренировочного
макроцикла, а группу В – 120 спортсменов, у которых тренировочный режим был с
высокой интенсивностью физических нагрузок.
С целью изучения эффективности проведенной коррекции иммунных и метаболических
нарушений часть спортсменов с высокой интенсивностью физических нагрузок
(группа В) была разделена по случайному признаку на группы В1 (30 человек), В2
(31 человек) и В3 (29 человек). Спортсмены группы В1 принимали с первого дня
подготовительного периода тренировочного макроцикла внутрь (per os) в виде чая
сбор лекарственных трав: корень и корневище солодки голой, аира болотного,
плоды шиповника, листья мяты перечной и горца птичьего. Сбор назначали по 100
мл, трижды в день, за 30-60 мин. до еды, на протяжении всего тренировочного
макроцикла. С первого дня подготовительного периода тренировочного макроцикла
препарат «Селен актив» спортсмены группы В2 принимали дважды в день внутрь в
суточной дозе 50 мг селена, 50 мг аскорбиновой кислоты и 150 мг сорбита в
течение всего тренировочного макроцикла. Спортсмены группы В3 принимали
комбинацию фитосбора и препарата «Селен-актив» (в вышеуказанных дозировках) в
течение всего тренировочного макроцикла.
2.2. Методы исследования
В периферической крови проводили подсчёт количества эритроцитов
(унифицированный метод подсчёта в счётной камере, 1972) и лейкоцитов в 1 л,
рассчитывали лейкоцитарную формулу.
Забор крови для иммунологических и биохимических исследований проводили в
начале и в конце каждого периода тренировочного макроцикла. Для выделения
лимфоцитов 15 мл крови брали из локтевой вены в пластиковые пробирки с
антикоагулянтом (раствор гепарина + раствор Версена) после 15 мин. пребывания
обследуемого в состоянии покоя в положении сидя. Лимфоциты выделяли на
градиенте плотности фиколла-верографина по модифицированной методике Boyum
[144]. Цельную кровь, разведенную в соотношении 1:1 средой 199, наслаивали на
смесь фиколла-верографина и центрифугировали 20 мин. при 500 g. Снятые
интерфазные кольца мононуклеарных клеток дважды отмывали в течение 10 мин.
средой 199. Затем ресуспендировали в полной питательной среде. Для подготовки
суспензии лимфоцитов в концентрации 2*(9 lg)/л проводили расчет по формуле: В =
(а/40-1)*с, где а – количество лимфоцитов в камере Горяева; с – количество
суспензии клеток, оставленных в пробирке; В – количество фосфатно-буферного
раствора, которое необходимо добавить. Использование описанного метода
позволяет выделять из крови около 90 % лимфоцитов. Суправитальное окрашивание
выделенных лимфоцитов трипановым синим свидетельствовало о жизнеспособности
98-99 % клеток.
Популяционный и субпопуляционный составы лимфоцитов (общих Т-лимфоцитов,
Т-хелперов/индукторов, Т-супрессоров/цитотоксиков, натуральных киллеров и
В-лимфоцитов) проводили методом непрямой иммунной флуоресценции с
использованием моноклональных антител, соответственно, CD3, CD4, CD8, CD16,
CD22 производства научно-производственного центра «Медбиоспектр» (Москва,
Российская Федерация) [141]. Клетками-мишенями для постановки реакции служили
лимфоциты, цитотоксическими антителами – моноклональные антитела в разведении
0,1-0,2 мкг/мл. Литической системой служила сыворотка крови кроликов,
проверенная на нетоксичность. Для тестирования использовали 96-луночные
планшеты, в лунки которых вносили по 0,025 мл моноклональных антител и
суспензии лимфоцитов в концентрации 2-4*(6 lg)/мл и инкубировали при 37 ° С в
течение 30-40 мин. Потом надосадочную жидкость отбирали, в лунки добавляли по
0,05 мл свежего комплемента и инкубировали планшеты при 37 °С в течение часа.
Для остановки цитотоксической реакции планшеты помещали в холодильник на 10-15
мин., потом в лунки вносили 0,1 % раствор трипанового синего и учитывали
результаты в камере Горяева под световым микроскопом.
Кислотную резистентность эритроцитов определяли спектрофотометрическим методом
при длине волны 720 нм [27]. Кровь разводили изотоническим раствором натрия
хлорид 1:500, 3 мл разведенной крови смешивали с равным объёмом раствора
хлористоводородной кислоты на изотоническом растворе натрия хлорид. Повышение
прозрачности суспензии эритроцитов, которое происходило в процессе гемолиза,